北美海蓬子甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及表达载体构建
PDF下载 (358)刘增美,朱天艺,龚一富 *,王何瑜,章 丽.北美海蓬子甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及表达载体构建[J].宁波大学学报(理工版),2015,28(04):16-19.DOI:
LIU Zeng-mei,ZHU Tian-yi,GONG Yi-fu *,WANG He-yu,ZHANG Li.Cloning of Gene from Salicornia bigelovii and its Expression Vectors Construction[J].Journal of Ningbo University(Natural Science & Engineering Edition),2015,28(04):16-19.DOI:
| Title: | Cloning of Gene from Salicornia bigelovii and its Expression Vectors Construction |
| 作者: | 刘增美, 朱天艺, 龚一富 *, 王何瑜, 章 丽 |
| Author(s): | LIU Zeng-mei, ZHU Tian-yi, GONG Yi-fu *, WANG He-yu, ZHANG Li |
| 关键词: | 北美海蓬子; 甜菜碱醛脱氢酶; 基因克隆; 载体构建 |
| Keywords: | Salicornia bigelovii; betaine aldehyde dehydrogenase; gene cloning; vector construction |
| 分类号: | Q781 |
| 文献标识码: | A |
| 摘要: | 以北美海蓬子种子为材料, 采用RACE技术获得北美海蓬子BADH基因的cDNA全长序列. 结果表明: BADH基因cDNA全长为1836bp, 其中开放阅读框(ORF)为1503bp, 编码500个氨基酸, 预测蛋白的分子量为54.5kDa, 理论等电点为5.31. 推测出BADH氨基酸中含有甜菜碱醛脱氢酶家族高度保守的十肽序列(VTLELGGKSP)及与酶功能相关的半胱氨酸残基(Cys). 序列比对和系统进化树显示, 北美海蓬子与盐节木和盐穗木的亲缘关系最近, 同源性达94%. 并构建了植物表达载体pCAMBIA3301-BADH, 将其成功导入到农杆菌EHA105中, 为进一步研究该基因的功能奠定了基础. |
| Abstract: | A full length cDNA sequence of BADH gene was cloned by RACE from Salicornia bigelovii seeds. The results show that the full length cDNA of BADH gene is 1836bp, which contains 1503bp ORF and encoded 500 amino acid with a putative molecular mass of 54.5 kDa and an isoionic point of 5.31.The deduced amino acid sequence contains the conserved decapeptide sequence (VTLELGGKSP) and cysteine residue in betaine aldehyde dehydrogenase. Sequence comparison and phylogenetic tree analysis reveal that Salicornia bigeloviiwas is close to Halocnemum strobilaceum and Halostachys caspica with 94% amino acids similarity. The plant expression vector pCAMBIA3301-BADH is successfully constructed, and the constructed vector is then transformed into Agrobacterium EHA105. The research is expected to lay a foundation for the further study on function of BADH gene. |
| 参考文献 /References: | [1] 洪平, 徐凯, 刘亚欣, 等. 抗旱耐盐基因与作物的改良及其在荒漠化治理中的前景[J]. 中国农学通报, 2008, 24(4):398-402. [2] 吕忠进, Glenn E P, Hodges R M, 等. 全海水灌溉的作物——北美海蓬子(上)[J]. 世界农业, 2001(2):14-16. [3] 李玉静, 宋宪亮, 杨兴洪, 等. 甜菜碱浸种对棉苗耐盐性的影响[J]. 作物学报, 2008(2):305-310. [4] Fan W J, Zhang M, Zhang H X, et al. Improved tolerance to various abiotic stresses in transgenic sweet potato (Ipomoea batatas) expressing spinach betaine aldehyde dehydrogenase[J]. PLoS One, 2012, 7(5):37-44. [5] 高天鹏, 王春燕, 徐红伟, 等. 盐生植物盐节木甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及表达[J]. 植物研究, 2013, 33(3): 317-338. [6] 周嘉裕, 廖海. 川芎甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析[J]. 西北农业学报, 2011, 20(3):45-51. [7] Zhao Y W, Hao J G, Bu H Y, et al. Cloning of HvBADH gene from bulless barley. and its transformation to tobacco[J]. Acta Agronomica Sinica, 2008, 34(7):1153- 1159. [8] 邢朝斌, 吴鹏, 陈龙, 等. 刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析[J]. 中草药, 2012, 43(1):155-158. [9] 刘振林, 戴思兰. 植物甜菜碱醛脱氢酶基因研究进展[J]. 西北农林科技大学学报: 自然科学版, 2004, 32(3): 105-112. [10] 李东魁, 王蒂, 张俊莲, 等. 转BADH基因马铃薯无性繁殖二代耐盐性检测[J]. 植物生理学通讯, 2007, 43(5): 873-875. |
| 备注/Memo: | 收稿日期: 2014-11-18. 宁波大学学报（理工版）网址: http://journallg.nbu.edu.cn/ 基金项目: 浙江省自然科学基金（LY13C020004）; 浙江省科技创新团队项目（2012R10029-07）; 宁波市科技攻关项目（2013C10018）. 第一作者: 刘增美（1987－）, 女, 浙江丽水人, 在读硕士研究生, 主要研究方向: 植物分子生物学. E-mail: zengmeiliu@sina.com *通信作者: 龚一富（1973－）, 男, 重庆开县人, 博士/副教授, 主要研究方向: 植物分子生物学. E-mail: gongyifu@163.com 宁波大学学报（理工版）网址：http://journallg.nbu.edu.cn/ |
