曼氏无针乌贼墨囊蛋白质提取及双向电泳条件优化
PDF下载 (625)詹萍萍,王春琳,宋微微,母昌考,李荣华.曼氏无针乌贼墨囊蛋白质提取及双向电泳条件优化[J].宁波大学学报(理工版),2013,26(02):1-6.DOI:
ZHAN Ping-ping,WANG Chun-lin,SONG Wei-wei,MU Chang-kao,LI Rong-hua.Optimization of Protein Isolation and Method of Two-dimensional Electrophoresis from the Ink Sac in Sepiella maindroni[J].Journal of Ningbo University(Natural Science & Engineering Edition),2013,26(02):1-6.DOI:
| Title: | Optimization of Protein Isolation and Method of Two-dimensional Electrophoresis from the Ink Sac in Sepiella maindroni |
| 作者: | 詹萍萍, 王春琳, 宋微微, 母昌考, 李荣华 |
| Author(s): | ZHAN Ping-ping, WANG Chun-lin, SONG Wei-wei, MU Chang-kao, LI Rong-hua |
| 关键词: | 墨囊; 蛋白质; 双向电泳 |
| Keywords: | ink sac; protein; two-dimensional electrophoresis |
| 分类号: | S917.4 |
| 文献标识码: | A |
| 摘要: | 应用TCA/丙酮沉淀法、裂解液法、裂解液－超速离心法以及层析法4种蛋白质样品制备方法, 比较了曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)墨囊蛋白质双向电泳的样品制备效果. 在此基础上, 比较了不同样品处理方法、不同胶条范围以及不同上样量等对电泳结果的影响, 筛选出一套较优的分离墨囊蛋白质的双向电泳条件. 研究结果表明: TCA/丙酮沉淀法较适合曼氏无针乌贼墨囊蛋白质双向电泳的样品制备. 该方法制备的曼氏无针乌贼墨囊蛋白质样品经双向电泳分离, 用固相pH 5~8梯度胶条进行等点聚焦, 上样量300μg, 电泳结束后硝酸银染色, 最终获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱. 经过初步图像分析, 检测到(389±19)个蛋白点, 背景清晰且蛋白质得率较高. |
| Abstract: | In order to develop an efficient protein extraction method suitable for two-dimensional electrophoresis (2-DE) from the ink sac in Sepiella maindroni, we compared four analytical approaches, which are the precipitation separation of TCA/acetone, the lyolysis buffer, the lyolysis-ultracentrifugation and the column chromatography for total protein extraction. We also compared the effects of different protein extraction methods, different IPG strips and different volumes of sample loaded on the 2-DE. The results show that the TCA/acetone precipitation is the most suitable method for the ink sac protein sample preparation for 2-DE, and the appropriate electrophoresis pattern can be obtained by loading 300 μg protein samples using the method of TCA/acetone precipitation, with IPG strips of pH 5-8 for the first dimensional electrophoresis and staining with silver nitrate. A total of (389±19) protein points are obtained by conducting image analysis. The improved TCA/acetone precipitation can achieve the highest resolution of two dimensional electrophoresis and high yield of protein, and the findings can facilitate the research of proteomics on the ink sac in Sepiella maindroni. |
| 参考文献 /References: | [1] 吕昌龙. 乌贼墨中微量元素含量的测定[J]. 中国中药杂志, 1995, 20(9):555. [2] 吕昌龙. 乌贼墨对小鼠移植瘤的抑制作用[J]. 实用肿瘤学, 1994, 8(1):6-7. [3] 马维娜. 乌贼墨的研究[J]. 长春中医学院学报, 1996, 12(57):52. [4] 赫生, 吕昌龙. 乌贼墨抗肿瘤活性的实验研究[J]. 中国医科大学学报, 1996, 25(2):134-135. [5] 侯雪云, 孙克任. 乌贼墨对H-(22)癌细胞TPK, PKC及PKA活性的影响[J]. 中国海洋药物, 2001, 6:17-19. [6] 江津津. 乌贼墨多酚氧化酶的部分特征[J]. 上海水产大学学报, 2002, 11(4):353-356. [7] 郑高利. 鱿鱼墨与乌贼墨部分化学成分与微量元素含量比较[J]. 中国海洋药物, 2002(3):12-14. [8] 黄枚. 乌贼墨抗癌活性的实验研究[J]. 福建中医学院学报, 2004, 14(1):22-23. [9] 王春琳, 樊晓旭, 余红卫, 等. 曼氏无针乌贼墨囊组织学及墨汁形成的超微结构[J]. 动物学报, 2008, 54(20): 366-372. [10] G?rg A, Postel W, Günther S. The current state of two-dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients[J]. Electrophoresis, 2002, 21(6):1037-1053. [11] Islam N, Lonsdale M, upadhyaya N M, et al. Protein extraction from mature rice leaves for two-dimensional gel electrophoresis and its application in proteome analysis[J]. Proteomics, 2004, 4:1903-1908. [12] 李勤, 黄建安, 刘硕谦, 等. 茶树蛋白质双向电泳样品制备技术研究[J]. 茶叶科学, 2011, 31(3):173-178. [13] 席景会. 低温胁迫下拟南芥差异蛋白质组学研究[D]. 长春: 吉林大学, 2007. [14] 黄福生, 黄河清, 黄慧英. 金乌贼视神经节蛋白质组分离方法的初步研究[J]. 厦门大学学报: 自然科学版, 2007, 46(3):406-410. [15] Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Anal Biochemistry, 1976, 72(7):248-254. [16] G?rg A, Boguth G, Obermaier C, et al. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis with immobilized pH gradients in the first dimension (IPG-DALT): The state of the art and the controversy of vertical versus horizontal systems[J]. Electrophoresis, 1995, 16(7):1079-1086. [17] 赵海豹, 林汝仙, 王升启. 蛋白质组学研究相关技术与进展[J]. 生物技术通讯, 2008, 19(6):903-905. [18] 朱金勇, 黄河清. 镉盐诱导的牙鲆脑、鳃、肝差异蛋白质组研究[D]. 厦门: 厦门大学, 2005. [19] 谢玲, 应万涛, 张开泰, 等. 双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白ANXH- human[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2000, 16: 569-573. [20] 颜真, 张英起. 蛋白质研究技术[M]. 西安: 第四军医大学出版社, 2007. |
| 备注/Memo: | 收稿日期: 2013－01－06. 基金项目: 国家自然科学基金（41176124, 41206114）; 教育部博士点基金（20103305110003）. 第一作者: 詹萍萍（1985－）, 女, 辽宁本溪人, 助理实验师, 主要研究方向: 水产动物遗传育种. E-mail: zhanpingping@nbu.edu.cn *通信作者: 王春琳（1965－）, 男, 浙江台州人, 教授, 主要研究方向: 水产经济动物繁育及人工养殖. E-mail: wangchunlin@nbu.edu.cn 宁波大学学报（理工版）网址：http://journallg.nbu.edu.cn/ |
