大黄鱼胚胎在不同稀释液及抗冻剂中的成活及超低温冷冻保存试验
PDF下载 (355)杨海燕,高心明,杜 晨,程 顺,沈伟良,竺俊全.大黄鱼胚胎在不同稀释液及抗冻剂中的成活及超低温冷冻保存试验[J].宁波大学学报(理工版),2020,33(3):7-12.DOI:
YANG Haiyan,GAO Xinming,DU Chen,CHENG Shun,SHEN Weiliang,ZHU Junquan.Screening of optimal diluents and cryoprotectants for cryopreservation of Larimichthys crocea embryos and evaluation of preservation effect[J].Journal of Ningbo University(Natural Science & Engineering Edition),2020,33(3):7-12.DOI:
| Title: | Screening of optimal diluents and cryoprotectants for cryopreservation of Larimichthys crocea embryos and evaluation of preservation effect |
| 作者: | 杨海燕, 高心明, 杜 晨, 程 顺, 沈伟良, 竺俊全 |
| Author(s): | YANG Haiyan, GAO Xinming, DU Chen, CHENG Shun, SHEN Weiliang, ZHU Junquan |
| 关键词: | 大黄鱼; 胚胎; 稀释液; 抗冻剂; 冷冻保存 |
| Keywords: | Larimichthys crocea; embryo; diluent; cryoprotectant; cryopreservation |
| 分类号: | S917.4 |
| 文献标识码: | A |
| 摘要: | 为了解大黄鱼胚胎在不同稀释液与抗冻剂中的成活及超低温冷冻保存的效果, 开展了大黄鱼胚胎在不同稀释液及抗冻剂中的成活试验. 结果表明, 大黄鱼原肠期胚胎在BS2稀释液中培育30min后的成活率与对照组无显著差异, 说明BS2可能适合作胚胎冷冻保存用稀释液; 单一抗冻剂对大黄鱼胚胎的毒性依次为丙二醇(PG)<甲醇(MeOH)<二甲基亚砜(DMSO)<二甲基甲酰胺(DMF)<乙二醇(EG), 抗冻剂使部分胚胎的卵黄囊皱缩, 胚体发生损伤, 影响胚胎的成活率及孵化率; 混合抗冻剂PMD (PGMeOHDMSO=965)对大黄鱼心跳期胚胎的毒性较小, 不影响胚胎的成活率及孵化率. 以BS2为稀释液, 40% PMD为抗冻液, 采用两步降温法进行超低温冷冻保存大黄鱼胚胎试验, 解冻后成功复活卵裂期及尾芽期冻胚各1粒, 原肠期冻胚2粒, 心跳期冻胚3粒. |
| Abstract: | To determine the optimal diluents and cryoprotectants for cryopreservation of Larimichthys crocea embryos, the survival rate of embryos under different diluents and cryoprotectants were analyzed. The results showed that there were no significant differences between control and experimental group treated by BS2 for 30min in the survival rate of gastrula stage embryos. The results indicated that BS2 may be an optimal diluent for L. crocea embryos. The crumpled yolk sac and damaged embryonic body were observed in given embryos treated with five most commonly used cryoprotectants 1,2-propylene glycol (PG), methanol (MeOH), dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF) and ethylene glycol (EG), causing reduction of the survival rate and hatching rate of embryos. The toxic effect of five cryoprotectants on L. crocea embryos was in the following sequence PG |
| 参考文献 /References: | [1] 陈松林. 鱼类配子和胚胎冷冻保存研究进展及前景展望[J]. 水产学报, 2002, 26(2):162-163. [2] Tian Y S, Zhang J J, Li Z T, et al. Effect of vitrification solutions on survival rate of cryopreserved Epinephelus moara embryos[J]. Theriogenology, 2018, 113:183-191. [3] 章龙珍, 鲁大椿, 柳凌, 等. 泥鳅胚胎玻璃化液超低温冷冻保存研究[J]. 水产学报, 2002, 26(3):213-217. [4] 武鹏飞, 丁浩, 田永胜, 等. 显微注射抗冻剂对牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎毒性及冷敏感性的影响[J]. 中国农学通报, 2009, 25(16):301-308. [5] Hagedorn M, Hsu E, Kleinhans F W, et al. New approaches for studying the permeability of fish embryos: Toward successful cryopreservation[J]. Cryobiology, 1997, 34(4):335-347. [6] 刘家富. 大黄鱼养殖与生物学[M]. 厦门: 厦门大学出版社, 2013:1. [7] 陈雄芳. 大黄鱼精子和胚胎的超低温保存研究[D]. 青岛: 中国海洋大学, 2004. [8] Tian Y, Jiang J, Song L, et al. Effects of cryopreservation on the survival rate of the seven-band grouper (Epinephelus septemfasciatus) embryos[J]. Cryobiology, 2015, 71(3):499-506. [9] 程顺, 家强, 竺俊全, 等. 甘油为抗冻剂超低温冷冻保存大黄鱼精子的DNA损伤[J]. 中国畜牧杂志, 2013, 49(11):34-36. [10] Yang H, Daly J, Carmichael C, et al. A procedure- spanning analysis of plasma membrane integrity for assessment of cell viability in sperm cryopreservation of zebrafish Danio rerio[J]. Zebrafish, 2016, 13(2):144-151. [11] Ji X S, Chen S L, Tian Y S, et al. Cryopreservation of sea perch (Lateolabrax japonicus) spermatozoa and feasibility for production-scale fertilization[J]. Aquaculture, 2004, 241(/4):517-528. [12] Zhang Y Z, Zhang S C, Liu X Z, et al. Toxicity and protective efficiency of cryoprotectants to flounder (Paralichthys olivaceus) embryos[J]. Theriogenology, 2005, 63(3):763-773. [13] 田永胜, 陈松林, 严安生, 等. [J]. 动物学报, 2003, 49(6):843-850. [14] Plachinta M, Zhang T, Rawson D M. Studies on cryoprotectant toxicity to zebrafish (Danio rerio) oocytes [J]. CryoLetters, 2004, 25(6):415-424. [15] Cabrita E, Robles V, Wallace J C, et al. Preliminary studies on the cryopreservation of gilthead seabream (Sparus aurata) embryos[J]. Aquaculture, 2006, 251(): 245-255. [16] 刘本伟. 牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎玻璃化冷冻保存方法及冷冻损伤机理研究 [D]. 青岛: 中国海洋大学, 2007. [17] 沈蔷. 玻璃化冻存对鲫鱼卵细胞的影响[D]. 杭州: 浙江农林大学, 2013. [18] 赵燕, 陈松林, 孔晓瑜, 等. 几种因素对牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的影响[J]. 动物学报, 2005, 51(2):320-326. [19] 田永胜, 陈松林, 于过才, 等. 大菱鲆胚胎的玻璃化冷冻保存[J]. 水产学报, 2005, 29(2):275-280. [20] 于过才, 陈松林, 孔晓瑜, 等. 鲈鱼胚胎程序化冷冻保存的研究[J]. 海洋水产研究, 2004, 25(1):1-8. [21] 曾志强, 张轩杰. 泥鳅胚胎冷冻前后生物学性状变化的研究[J]. 湖南师范大学自然科学学报, 1995, 18(4): 40-44; 87. [22] 姜静, 田永胜, 翟介明, 等. 超低温冷冻保存对七带石斑鱼胚胎酶活性的影响[J]. 农业生物技术学报, 2014, 22(4):476-485. [23] 王春花, 陈松林, 田永胜, 等. 牙鲆胚胎程序化冷冻保存研究[J]. 海洋水产研究, 2007, 28(3):57-63. |
| 备注/Memo: | 收稿日期:2019-07-04.宁波大学学报（理工版）网址:http://journallg.nbu.edu.cn/ 基金项目:浙江省科技计划重大项目（2016C02055-7）;宁波市农业重大专项（2015C110005）;浙江省农业(水产)新品种选育重大科技专项（2016C02055-7-2）;国家海水鱼产业技术体系（CARS-47-Z08）. 第一作者:杨海燕（1990－）,女,河南信阳人,在读硕士研究生,主要研究方向:水产生物学.E-mail:1402851835@qq.com *通信作者:沈伟良（1983－）,男,浙江桐乡人,博士,主要研究方向:鱼类繁殖生理与遗传育种.E-mail:sweleon@163.com 宁波大学学报（理工版）网址：http://journallg.nbu.edu.cn/ |
